培养基的配制是怎么样的?

如题所述

1.培养基种类及成分

培养基根据其物理性状大致分成两类,即固体和液体培养基。在培养基中加入一定量的凝固剂(如琼脂、明胶等)即为固体培养基,而不加入凝固剂的即为液体培养基,具体运用上应视培养目的要求不同分别选择采用。

无论是固体还是液体培养基,其基本成分是类似的,一般可大致分为两个部分,即基本培养基如MS、B5、N6、Nitsh等和附加成分,如激素和天然附加物等,其基本成分如表1、表2。

表1 几种培养基主要成分表

表2 几种培养基附加成分表

2.培养基的配制

(1)母液的配制与保存 由于培养不同植物,需要配制不同的培养基。为了减少工作量,可先把药品配成母液(即浓缩液),一般扩大10~100倍,其中大量元素倍数略低,一般为10~20倍,微量元素和有机成分及铁盐等可扩大50~100倍。母液的配制及保存应注意以下几个方面:①药品称量应精确,尤其微量元素化合物应精确至0.0001克,大量元素化合物可精确至0.01克。②配制母液的浓度适当,倍数不宜过大,一是长时间保存后易沉淀,二是浓度大,用量就少,在配制培养基时易影响精确度。③母液贮藏也不宜过长,一般几个月左右,在配好的母液容器上应注明配制日期,以便定期检查,如出现浑浊、沉淀及霉菌等现象,就不能使用。④母液应在2~4℃的冰箱内保存。

(2)培养基的配制 首先要根据培养基配方,算好母液吸取量,并按顺序吸取,然后加入蔗糖溶液,并加入蒸馏水定容至所需体积,并用0.1~1摩尔/升的盐酸或氢氧化钠调整pH,加入琼脂加热溶化,配制好的培养基要趁热分注,倒入试管、三角瓶等培养器皿中,一般至容器1/4~1/5左右,最后加塞或封口准备消毒。

(3)培养基的消毒 由于培养基内有丰富营养物质,极利于细菌和真菌繁殖,造成污染,影响组培的成功,因此培养基消毒是必不可少的一个环节。一般采用高温高压消毒和过滤消毒两种方法。

高温高压消毒:一般用消毒锅消毒,把装有培养基的培养器皿先放入消毒篓中,再放入加有水的消毒锅内,注意容器不能装得过满,以免影响锅内蒸汽循环。装好后将锅盖拧紧,加热,并打开放气阀,待水煮沸后,放气3~5分钟排出锅内冷空气,即可关上放气阀并继续加热,使锅内保持108千帕压力、温度120℃左右,大约15~20分钟即可。

过滤消毒:一些易受高温破坏的培养基成分如引哚乙酸(IAA)、引哚丁酸(IBA)、玉米素(ZT)等,不宜用高温高压法消毒,则可用过滤消毒后加入至高温高压消毒的培养基中,过滤消毒可用细菌过滤消毒器,通过其中的0.45微米孔径的滤膜将直径较大的细菌等滤去,过滤消毒应在无菌室或超净工作台上进行,以避免污染培养基。

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第1个回答  2021-04-27

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第2个回答  2019-11-22
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