不可以
根据2018年交通部发布《道路旅客运输企业安全管理规范》第38条规定：长途客运车辆凌晨2时至5时停止运行或实行接驳运输；从事线路固定的机场、高铁快线以及短途驳载且单程运营里程在100公里以内的客运车辆，在确保安全的前提下，不受凌晨2时至5时通行限制。
如果乘坐的大巴车里程超过100公里，且安排的固定线路包含高速公路，在凌晨2时至5是不可以行使的。
根据根据2018年交通部发布《道路旅客运输企业安全管理规范》第38条规定，禁止在夜间驾驶客运车辆通行达不到安全通行条件的三级及以下山区公路，司机日间连续驾驶时间不得超过4小时，夜间连续驾驶时间不得超过2小时，每次停车休息时间应不少于20分钟。
如果夜间长途客车连续驾驶超过2小时，运输组织是不会组织这个时段的客运活动的。只有符合固定线路，单程运营里程在100公里以内的客运车辆，在确保安全的前提下（夜间长途客车连续驾驶低于2小时），不受凌晨2时至5时通行限制，是可以在高速公路行驶。
扩展资料：
《道路旅客运输企业安全管理规范》第三十八条 客运企业在制定运输计划时应当严格遵守客运驾驶员驾驶时间和休息时间等规定：
（一）日间连续驾驶时间不得超过4小时，夜间连续驾驶时间不得超过2小时，每次停车休息时间应不少于20分钟；
（二）在24小时内累计驾驶时间不得超过8小时；
（三）任意连续7日内累计驾驶时间不得超过44小时，期间有效落地休息；
（四）禁止在夜间驾驶客运车辆通行达不到安全通行条件的三级及以下山区公路；
（五）长途客运车辆凌晨2时至5时停止运行或实行接驳运输；从事线路固定的机场、高铁快线以及短途驳载且单程运营里程在100公里以内的客运车辆，在确保安全的前提下，不受凌晨2时至5时通行限制。
客运企业不得要求客运驾驶员违反驾驶时间和休息时间等规定驾驶客运车辆。企业应主动查处客运驾驶员违反驾驶时间和休息时间等规定的行为，发现客运驾驶员违反驾驶时间和休息时间等规定驾驶客运车辆时，应及时采取措施纠正。
参考资料：
《国务院关于加强道路交通安全工作的意见》规定了凌晨2点到5点大巴在高速公路不可以行驶。
根据《国务院关于加强道路交通安全工作的意见》第二条第五款 严格长途客运和旅游客运安全管理。严格客运班线审批和监管，加强班线途经道路的安全适应性评估，合理确定营运线路、车型和时段，严格控制1000公里以上的跨省长途客运班线和夜间运行时间，对现有的长途客运班线进行清理整顿，整改不合格的坚决停止运营。
创造条件积极推行长途客运车辆凌晨2时至5时停止运行或实行接驳运输。客运车辆夜间行驶速度不得超过日间限速的80%，并严禁夜间通行达不到安全通行条件的三级以下山区公路。
扩展资料：
夜间遇暴雨、浓雾等影响安全视距的恶劣天气时，可以采取临时管理措施，暂停客运车辆运行。加强旅游包车安全管理，根据运行里程严格按规定配备包车驾驶人，逐步推行包车业务网上申请和办理制度，严禁发放空白旅游包车牌证。
运输企业要积极创造条件，严格落实长途客运驾驶人停车换人、落地休息制度，确保客运驾驶人24小时累计驾驶时间原则上不超过8小时，日间连续驾驶不超过4小时，夜间连续驾驶不超过2小时，每次停车休息时间不少于20分钟。有关部门要加强监督检查，对违反规定超时、超速驾驶的驾驶人及相关企业依法严格处罚。
参考资料：
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