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凝胶电泳条带不清晰的原因
如何选用琼脂糖
凝胶电泳
时的marker?有什么标准吗?
答:
那么用分子量最大到1000,或者500的marker就比较合适。如果分子量很大,例如在几k,就可能会选择向lamda HindIII这样最大到23K的marker。否则
凝胶
浓度不合适,marker
条带
分不开,影响对你目标分子分子量的判断。以前我们在实验室用得最多的是2000,和15000的marker,能覆盖大部分分子量的检测。
双酶切体系一般怎么优化
答:
酶切连接产物经预扩增后,在1.0%琼脂糖凝胶上电泳检测,可见在400bp左右呈明亮的连续一片,即通常所说的“smear”状(如图2),这是符合AFLP技术要求的。但在预扩增后的琼脂糖
凝胶电泳
检测中,常出现
条带
很弱的现象,其
原因
可能在以下几方面:① 酶切不充分,导致预扩增产物的分子量大小不符合AFLP分析的要求;② 连接...
蛋白质 Marker 是啥意思?还有DNA Ladder
答:
蛋白marker是用于蛋白质的聚丙烯酰胺
凝胶电泳
中衡量样品分子量大小的标尺,其中混合有已知分子量的蛋白,通过
电泳条带
所对应的蛋白marker的区间来判断分子量。同理DNA Ladder是用于核酸琼脂糖凝胶电泳衡量样品分子量大小的标尺,用法同蛋白marker。
脉冲场
凝胶电泳
脉冲场凝胶电泳(PFGE'S Agarose)
答:
脉冲场
凝胶电泳
(PFGE)是一种常用的DNA分子分离技术,其使用两种类型的琼脂糖:InCert琼脂糖和SeaKem Gold琼脂糖。InCert琼脂糖,由LONZA公司生产,特别适合于兆碱基片断DNA的制备和PFGE实验。其特点是在1.5%浓度下,胶凝温度在26℃至30℃之间,硫酸盐含量低于0.15%,熔化温度不超过70℃,湿度需控制在...
琼脂糖
凝胶电泳
,做胶加EB目的
答:
可见光下看不见DNA的。所以加EB也好,SYBR green也好,我们实验室用的genefinder也好,都是将DNA染色,用特殊的化学分子与DNA结合,并且在特殊波长的激发光下发射荧光,荧光强度与DNA含量成正比。所以染色之后,在激发光下就可以看到DNA的条带,并且根据
条带的
位置和marker对比就可以判断DNA的大小,根据条...
电泳
技术在生物分离工程中的地位
答:
使用
电泳
方法分离CK-MB,是根据CK-同工酶分子结构不同,医|学教育网搜集整理在电泳缓冲液中,所带电荷各异,可以从阴极到阳极将CK不同组份予以分离,其分别为CK-MM,CK-MB和CK-BB.电泳特点是当出现异常2同工酶如巨CKⅠ、巨CKⅡ等,从电泳图谱上很容易发现,由扫描仪对各条酶进行扫描,报告各条区带所占百分比,...
急切求解WB,IHC的意思!
答:
(一)蛋白质样品获得:细菌诱导表达后,可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞,真核细胞加匀浆缓冲液,机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃,13,000g离心15min。取上清液作为样品。 (二)电泳:制备
电泳凝胶
,进行SDS-PAGE。 (三)转移:(半干式转移) 1、电泳结束后将胶条割至合适大小,用转膜缓冲液平衡,5min×3次。
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