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蓝白斑筛选目的
如何提高杆状病毒的重组效率
蓝白斑筛选
答:
当培养液中加入IPTG,IPTG可以和乳糖操纵子下游的的阻遏蛋白结合,使阻遏蛋白从DNA上脱离,激活半乳糖苷酶的表达。因而重组质粒可以利用x-gal而感受态不能。这个是
蓝白斑筛选
的主要原理。结果中白斑表示重组质粒表达的菌体,蓝斑表示未表达。至于氨苄筛选,通常不会利用氨苄抗性进行筛选,因为感受态中是否有...
蓝白斑筛选
实验,结果都是白斑说明所有的细胞都插入基因成功了吗?_百 ...
答:
我觉得你更可能是培养基出问题了或者其他的
蓝白斑筛选
不可能所有的都是白斑的,连接效率没有那么高 建议你再检查下自己的实验
...同时在培养基中表达,怎样区分和
筛选
出
目的
基因?
答:
一般有两种方法,一是用
目的
基因的特异性引物以重组质粒为模板,进行PCR扩增。看能否出现目的基因的扩增产物。还有一种是将纯化的质粒进行酶切,因为目的基因连接到载体质粒上时两边都带有人工添加的酶切位点,只要用这些内切酶进行酶切,然后看能否有目的基因的片段被切下来,则可以判定目的基因有没有插入...
大肠杆菌BL21可用于
蓝白斑筛选
吗
答:
在进行
蓝白斑筛选
的时候,出现了两个奇怪现象:一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑。二、连有
目的
基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌。不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的。
请问
蓝白斑筛选
后的细菌PCR后仍有条带怎么办
答:
问题有多个方面,我列一下,需要你自己排查,毕竟我没有看到图片不好说:1、
蓝白斑
本身就有假阳性,看看你跑的没条带都是这样的吗?如果个别的出现杂带可能就是蓝白斑假阳性2、PCR退火温度是否合适,引物是否合适,如果既有
目的
条带又有杂带那么可能就需要从这个方面找原因了 查看原帖>> ...
蓝-
白斑筛选
简介
答:
在基因工程的工具箱中,
蓝白斑筛选
扮演着重要的角色。这种方法主要应用于重组菌的筛选过程。通常,我们从野生型的大肠杆菌开始,这种细菌天然具备产生β-半乳糖苷酶的能力。这种酶具有特殊的功能,能够将无色的化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)分解为半乳糖和一种深蓝色的化合物,即...
一学生用
蓝白斑
做阳性克隆
筛选
,因为疏忽没有在选择性培养基中添加X-gal...
答:
1 不是。因为没有生色底物,阴性菌落虽然可以表达lacZ,但无法显色。2 全部转接至含X-gal的新鲜选择培养基上,培养后看是否为白色。要么以pcr法对所有菌落作鉴定。或者所有菌落转接至液体培养基扩增后抽质粒,看质粒大小。
蓝白
筛选
只有
白斑
答:
是的 我也常遇到这样的情况 我猜想你插入的片段是300-1500BP之间 这样大小的片段是最好连接的 所以有很高的重组率 这是正常的 如果你还不放心可以挑一个单菌落 作一下酶切检定
IPTG用来
筛选蓝白斑
需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败...
答:
因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现
蓝白斑
的
筛选
了。根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用。
蓝白斑筛选
假阳性是怎么回事?
答:
假阳性:由于时间太长,氨苄青霉素被阳性大肠杆菌降解,不抗氨苄青霉素的大肠杆菌就会长出来形成
白斑
,而这些大肠杆菌不含载体和外源基因,因此是假阳性。
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