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蓝白斑筛选时为何全是白色
蓝白斑筛选
实验,结果
都是白斑
说明所有的细胞都插入基因成功了吗?_百 ...
答:
我觉得你更可能是培养基出问题了或者其他的 蓝白斑筛选不可能所有的都是白斑的
,连接效率没有那么高 建议你再检查下自己的实验
一学生用
蓝白斑
做阳性克隆
筛选
,因为疏忽没有在选择性培养基中添加X-gal...
答:
1
不是。因为没有生色底物
,阴性菌落虽然可以表达lacZ,但无法显色。2 全部转接至含X-gal的新鲜选择培养基上,培养后看是否为白色。要么以pcr法对所有菌落作鉴定。或者所有菌落转接至液体培养基扩增后抽质粒,看质粒大小。
蓝白斑筛选
中,
为什么白色
菌落不一定是重组子
答:
由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落,因而易于识别。然而,当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段,使得带有重组质粒的细菌形成
白色
菌落。这种重组子的筛选,又称为
蓝白斑筛选
。如用蓝白斑筛选则经连接产物转...
蓝白筛选
只有
白斑
答:
是的 我也常遇到这样的情况 我猜想你插入的片段是300-1500BP之间 这样大小的片段是最好连接的 所以有很高的重组率 这是正常的 如果你还不放心可以挑一个单菌落 作一下酶切检定
蓝白斑
选择中重组体和空载体的颜色分别是什么
答:
导致β-半乳糖苷酶活性的丧失。因此,带有重组质粒的菌落无法在含有IPTG和X-gal的培养基上产生蓝色,而是呈现
白色
。基于这种颜色差异,可以直接区分重组体(白色菌落)和空载体(蓝色菌落),从而实现对重组子的有效筛选。这种
蓝白斑筛选
方法因其简单直观、操作方便而在基因工程中得到了广泛应用。
蓝白斑筛选
的蓝白斑筛选原理
答:
但它们同时存在时。α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。这样,lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地破坏α片段的编码,使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成
白色
菌落。
蓝白斑筛选
答:
因为它们无法产生β-半乳糖苷酶分解乳糖。在麦康凯培养基上,α-互补的Lac+细菌能分解乳糖产生乳酸,使pH值降低,形成红色菌落。相反,外源片段插入后的菌落由于缺乏α-互补,无法分解乳糖,因此在麦康凯培养基上表现为
白色
菌落,这便是
蓝白斑筛选
技术直观呈现的结果。
蓝白斑筛选
的原理是什么?
答:
由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地破坏α片段的编码,使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成
白色
菌落。这种重组子的筛选,称为
蓝白斑筛选
。
蓝白斑筛选
问题!!
答:
使其从DNA上解离,激活半乳糖苷酶的表达,使得含有重组质粒的菌体能够利用x-gal,而感受态细胞则不能。因此,
蓝白斑
的结果中,
白色
区域代表了成功表达的重组质粒,蓝色则表示未表达。至于氨苄
筛选
,通常并不依赖于氨苄抗性,因为感受态细胞中氨苄抗性基因的存在不确定性,这可能导致筛选结果的不准确性。
蓝白斑筛选
的原理是什么?
答:
由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地破坏α片段的编码,使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成
白色
菌落。这种重组子的筛选,称为
蓝白斑筛选
。
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