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蓝白斑筛选时三种情况的原因
蓝白斑筛选
问题
答:
没有白斑的原因,要么是没连上,要么是没转化成功
。从连接产物,到菌种都排查一下吧!
TA克隆
蓝白斑筛选
答:
1、可能你的感受态细胞都死亡了,根本就没有活菌,就不长了
。2、
可能是没连接上
,没有就没有完整的载体转入感受态细胞,自然也不会生长。3、
可能用的抗生素不对
,抗生素与耐药载体不符合,也不会生长。4、
抗生素量太大
,培养是时间太短,细菌还没有长起来。5、
涂布时,玻璃棒太热,把细菌都烧死了
。
蓝白斑筛选
简介
答:
蓝白斑筛选是一种在基因工程领域广泛应用的筛选技术,其主要目的是鉴别和选择经过基因改造的大肠杆菌
。这种筛选方法依赖于大肠杆菌的天然特性。在野生型大肠杆菌中,存在一种名为β-半乳糖苷酶的酶。当这种酶遇到无色的化合物X-gal,也就是5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷时,会发生化学反应。酶...
从大肠杆菌基因型理解
蓝白斑筛选的
原理
答:
蓝白斑筛选技术利用的是lacZ基因的缺失突变
,如lacZΔM15,这个突变会导致α片段的缺失,使得β-半乳糖苷酶活性受限。当与异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)结合时,只有完整lacZ基因的菌株才能产生蓝色,因为X-gal(5-溴-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside,X-四氮唑紫)只能被β-半乳糖苷酶...
蓝白斑筛选
问题!!
视频时间 00:48
蓝白斑筛选
答:
蓝白斑筛选的
过程依赖于α-互补产生的Lac+细菌。在含有生色底物X-gal和IPTG的培养基中,Lac+细菌会形成蓝色菌落,因为它们在IPTG诱导下产生蓝色的β-半乳糖苷。然而,如果外源片段插入载体的多克隆位点,会破坏编码区域,导致蛋白表达失常,丧失α-互补能力。在这种
情况
下,转化子在生色诱导培养基上形成...
蓝白斑筛选
适用方面
答:
lacz'基因中的α肽链与宿主菌的缺陷β-半乳糖苷酶互补,当添加IPTG时,启动子被激活,使得α肽链和缺陷酶能够协同作用,使X-gal变蓝。未携带外源DNA的宿主菌(空载体)在含X-gal平板上呈现蓝色菌落,而含有重组质粒(含目的片段)的菌株由于α肽链编码被破坏,无法产生蓝色菌落,表现为白色。
蓝白斑筛选
...
蓝白斑筛选
问题!!
答:
使其从DNA上解离,激活半乳糖苷酶的表达,使得含有重组质粒的菌体能够利用x-gal,而感受态细胞则不能。因此,
蓝白斑的
结果中,白色区域代表了成功表达的重组质粒,蓝色则表示未表达。至于氨苄
筛选
,通常并不依赖于氨苄抗性,因为感受态细胞中氨苄抗性基因的存在不确定性,这可能导致筛选结果的不准确性。
蓝白斑筛选的
原理是什么?
答:
LacZα,也不会形成蓝色菌落。突变也会导致 α 片段不被表达。完全没有载体的菌落也会出现白色,有时可能会在抗生素后显示为卫星菌落已用完。蓝色菌落也可能包含插入物。当插入片段与 LacZα 基因“符合读框”且插入片段中不存在终止密码子时,就会发生这种
情况
。以上内容参考 百度百科-
蓝白斑筛选
...
蓝白斑筛选的
原理是什么?
答:
由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地破坏α片段的编码,使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选,称为
蓝白斑筛选
。
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