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细菌感受态制备
感受态
细胞的
制备
答:
目前,
感受态细胞的制备常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备
,即用低渗CaCl2溶液在低温(0℃)时处理快速生长的细菌,从而获得感受态细菌.此时细菌膨胀成球形,外源DNA分子在此条件下易形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附在细菌表面,通过热激作用促进细胞对DNA的吸收.转化效率可达106-107转化子/微克DNA。注意...
感受态
细胞的
制备
答:
感受态细胞的制备如下:
1、从37℃培养过夜的新鲜平板中挑DH5α单菌落,接种到5mLLB培养基中,37℃下270r/min震荡培养过夜
;2、取2mL过夜培养菌液注入到100mLLB培养基中,37℃下激烈震荡培养至A600=0.4~0.6(约2h);3、将培养液转移到灭菌过的50mL离心管中,在冰上放置10min;4℃下4000r/min...
感受态
细胞的
制备
方法是什么?
答:
感受态细胞制备常用方法是CaCl2法
。感受态细胞:是指用理化方法诱导细胞,吸收周围环境中的DNA分子,使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。CaCl2法制作感受态细胞的步骤:1.将大肠杆菌DH5a感受态细胞接种于普通LB平板上, 37℃恒温培养箱培养12-16h,挑取单个菌落,接种至10 mLLB普通肉汤中,37空气摇床震...
常用
感受态
细胞
制备
方法有哪些?
答:
细菌转化的方法多以Mendel和Higa(1970)的发现为基础,其基本方法是用冰预冷的CaCl2或多种2价阳离子等处理细菌,使之进入感受态得以转化。用CaCl2制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞,常用于成批
制备感受态细菌
。本法适用于大多数大肠杆菌菌株,且迅速、重复性好。操作过程简述如下。1.从37℃培养16~20h...
感受态
的
制备
可以不划平板直接接菌种吗?
答:
不可以
。感受态细胞是指细菌在一定生理条件下吸收外源DNA分子的生理状态,能摄取外源DNA分子。如果直接接菌种,无法保证细菌处于感受态,所以感受态的制备不可以不划平板直接接菌种。
感受态
细胞的
制备
视频时间 1:10
如何
制备
大肠杆菌
感受态
细胞
答:
大肠杆菌
感受态
细胞的
制备
和转化 准备:一.材料 E.coli DH5α菌株:Rˉ,Mˉ,Ampˉ;pBS质粒DNA:购买或实验室自制,eppendorf管.二.设备 恒温摇床,电热恒温培养箱,台式高速离心机,无菌工作台,低温冰箱,恒温水浴锅,制冰机,分光光度计,微量移液枪.三.试剂 1.LB固体和液体培养基 2.Amp母液 3.含Amp的...
制备感受态
细胞的关键是什么
答:
制备感受态
细胞的关键是将外源DNA分子引入受体
细菌
,使之获得新的遗传性状。主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大,直观的说,使得细胞膜表面出现一些孔洞,便于外源基因或载体进入感受态细胞。由于细胞膜的流动性,这种孔洞会被细胞自身所修复。将构建好的载体转入感受态细胞进行表达,不仅可以检验重组载体...
感受态
细胞的
制备
是什么?
答:
感受态细胞的制备常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备
,即用低渗CaCl2溶液在低温0℃时处理快速生长的细菌,从而获得感受态细菌。感受态细胞的特点 理化方法诱导细胞,使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大,直观的说使得细胞膜表面出现一些孔洞,便于外源基因或...
大肠杆菌
感受态
细胞的
制备
及质粒的转化结果怎么分析?
答:
材料及方法 菌种:大肠杆菌BL21菌株 质粒:pGEX-6P-1
感受态制备
方法:CaCl2法 转化方法:热激法 CaCl2
制备感受态
的原理。
细菌
处于0·C,CaCl2的低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42·C短时间热冲击处理,促使细胞吸收DNA复合物。感受...
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