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细菌基因敲除服务
细菌
的
基因敲除
怎么做
答:
传统
细菌基因敲除
基于细菌中广泛存在RecBCD系统,外源DNA片段(主要是自杀质粒)通过电转化或接合方式进入受体菌与基因组同源片段进行重组,实现基因的插入突变与缺失突变。另一种为利用来源于λ噬菌体的重组系统提供的重组酶,实现电转入的DNA片段(PCR产物)与基因组同源片段的替换,该种技术目前仅能在大肠...
基因敲除
的意义是什么?
答:
基因敲除
(knockout)是指一种遗传工程基因修饰技术,针对某个感兴趣的遗传基因,通过一定的基因改造过程,令特定的基因功能丧失,并研究可能进一步对相关生命现象造成的影响,进而推测该基因的生物学功能.主要是研究这个基因的功能的,我就做这个,敲除的是
细菌
的基因,有需要的话可以交流交流 ...
crisper cas9
基因敲除
原理
答:
crisper cas9
基因敲除
原理介绍如下:基本原理:CRISPR簇是一个广泛存在于细菌和古生
菌基因
组中的特殊DNA重复序列家族,其序列由一个前导区(Leader)、多个短而高度保守的重复序列区(Repeat)和多个间隔区(Spacer)组成。前导区一般位于CRISPR簇上游,是富含AT长度为300~500bp的区域,被认为可能是CRISPR簇的...
有人用CRISPR/Cas9系统做细胞
基因敲除
吗交流下
答:
有人用CRISPR/Cas9系统做细胞
基因敲除
是的,确切来说是大量表达。 大肠杆菌是基因重组技术中常用的
细菌
,将外源目的基因(如人胰岛素基因)导入大肠杆菌后可在大肠杆菌内表达目的蛋白(如胰岛素),由于细菌繁殖速度快,通过发酵便可在短时间内获得大量胰岛素,再经多步分离、纯化便得到了药用胰岛素。流程大概...
细菌基因敲除
,只要敲除编码区中少数几个,还是把整个编码区都敲除?或者...
答:
一般只要
敲除
编码区一小段(1/3-1/4
基因
全长)就可以达到目的,但是你干吗不全敲除了呢?留下那么一小段还会翻译出无活性蛋白片断或者副作用的什么产物,还浪fei细胞资源。启动子区域 能不能被敲除 要看这个基因是不是单独享用的这个启动子,一般在原核细胞是操纵子(多基因共用一个启动子),那...
crisper能用于
细菌基因敲除
吗
答:
近年来的研究发现,一些小的双链RNA可以通过促使mRNA降解,高效、特异的阻断体内特定基因表达。称为RNA干扰(RNA interference,RNAi)。由于RNAi可以作为一种简单有效的代替
基因敲除
的工具,在功能基因组学研究、基因治疗等领域得到了越来越多...
crispr cas9
基因敲除
原理是什么?
答:
基本原理:CRISPR簇是一个广泛存在于细菌和古生
菌基因
组中的特殊DNA重复序列家族,其序列由一个前导区(Leader)、多个短而高度保守的重复序列区(Repeat)和多个间隔区(Spacer)组成。前导区一般位于CRISPR簇上游,是富含AT长度为300~500bp的区域,被认为可能是CRISPR簇的启动子序列。重复序列区长度为21~...
怎样确定一个
基因
是否被敲出
答:
很简单,直接以靶基因的敲除位点为模板做PCR,如果是阴性,就是敲除成功。或者是提RNA后做RT-PCR。由于
基因敲除
往往不是敲除的整段基因,所以引物设计的时候要针对敲除的那个部位。楼上说的只能表明外源基因的进入,但不能证明目的基因已经被去掉了。
微生物代谢工程中的常用
基因
操作技术有哪些
答:
在硫化
细菌
核苷水解酶对底物专一性的研 究中,采用定点突变技术,对编码 221 位和 228 位氨基酸的 DNA 序列进行突变,改变两个位点的氨基酸,从而研究氨基酸残基对底物结合的影响。
基因敲除
(gene knock-out):又称基因打靶,通过外源 DNA 与染色体 DNA 之间的同源重 组,进行精确的定点修饰和基因改造,...
CRISPR/Cas9在研究
基因
功能中的应用是怎样的?
答:
此外,还证明了利用 CRISPR-Cas 技术构建的
基因敲除
大鼠模型与传统方法构建的同一基因(肥胖相关 G 蛋白偶联受体 Mc4R)突变大鼠相比具有一致的表型。该方法构建的基因突变动物具有显著高于传统方法的生殖系转移能力,是一种可靠、高效、快速的构建敲除动物模型的新方法。[3]...
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