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如何克隆基因
基因克隆
的方法主要有哪几种?简述各种方法的原理和用途。
答:
(4)图位克隆:首先定位目的基因到染色体的特定位置
,然后通过染色体步移技术克隆位于两个紧密连锁标记之间的基因片段。后续通过基因功能互作原理来鉴定目的基因,用于分离未知性状相关基因。
从生物体
克隆
目的
基因
的方法有哪些?
答:
PCR扩增克隆法是在已知植物基因序列的基础上,进行基因序列克隆的一种方法
。先从基因文库(genebank)中找到有关基因序列,据此合成一对寡聚核苷酸引物,从植物中提取染色体DNA或RNA,进行PCR扩增。扩增的片段纯化后插入合适的质粒载体上,用酶切分析和序列分析检测重组子,并与已知基因序列比较,以获得目的基...
基因克隆
的基本步骤有哪些
答:
(4)免疫学筛选法:获得目的基因表达的蛋白抗体
,就可以采用免疫学筛选法获得目的基因克隆。这些抗体即可是从生物本身纯化出目的基因表达蛋白抗体,也可从目的基因部分ORF片段克隆在表达载体中获得表达蛋白的抗体。
何谓
基因克隆
?简述基因克隆的基本过程。
答:
【答案】:
基因克隆
的概念:应用酶学的方法,在体外将目的基因与载体DNA结合成具有自我复制能力的复制子,继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增,提取获得大量同一DNA分子的过程。基因克隆的基本过程包括:①目的基因的获取;②克隆载体的选择与构建;③目的基因与载体的连接...
目的
基因克隆
的基本原理
答:
2. 将目标
基因克隆
到载体上:将目标基因与载体(如质粒或病毒)进行连接,形成重组DNA。可以通过DNA连接酶(如DNAligase)或人工合成DNA等方法实现。3. 转化重组DNA:将重组DNA转化到另一个生物体的细胞中,让其自身产生该目标基因,并在细胞分裂时将该基因传递给后代细胞。4. 选出目标基因的克隆体:...
基因克隆
的常用方法有哪几种?
答:
根据已知探针
克隆基因
这也是
基因克隆
的一种较直接的方法。首先将探针作放射性或非放射性标记,再将其与用不同内切酶处理的基因组DNA杂交,最后将所识别的片段从胶中切下来,克隆到特定的载体(质粒、噬菌体或病毒)中作序列测定或功能分析。这种方法不但可以将基因克隆出来,还能同时观察该基因在基因组中的...
基因克隆
的方法主要有哪几种,简述各种方法的原理和用途
答:
选择目的
基因
,并设计相应引物;用引物PCR扩增目的基因片段;选择合适(抗性标记、酶切位点等)的
克隆
载体(为了保真扩增),并将PCR片段连接入克隆载体中;(一般用Taq酶的PCR产物在末尾会自带一个A,可在Solution 1作用下与两端各带一个T的线性T载体直接相连)将连接产物转化入感受态大肠杆菌,使之在含有...
基因克隆
的方法有哪些
答:
简单的说一下:扩增目的
基因
,比如通过PCR的方法。PCR扩增的序列可以通过酶切或者TOPO TA的方法插入到载体质粒。转染大肠杆菌 筛选阳性
克隆
一般常采用蓝白克隆方法,就是在载体上,序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列,如果不被破坏,产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物,形成蓝色产物。
怎样克隆
一个目的
基因
?
答:
(1)
基因
标鉴法。该法是利用转座子或T-DNA插入植物的基因组中引起某一基因失活产生一些突变体,然后用相应转座子或T-DNA对突变体文库进行筛选,以选到的阳性
克隆
片段为探针,再筛选野生型植物因文库分离目的基因。如将一株带有功能的转位因子系统的植物与另一株在遗传上有差异的同种植物杂交,在杂交后代中筛选由于...
基因克隆克隆
过程概述
答:
体外重组包括粘端连接和平端连接,通常使用限制性内切酶切割形成粘性末端,然后通过DNA连接酶结合。不同类型的连接策略用于适应不同的
克隆
目的,例如通过修饰获得粘性末端以插入平端DNA到表达载体中。导入宿主细胞的方法包括转化、转染和转导。重组DNA通过这些方法进入原核细胞如大肠杆菌,然后筛选出包含目的
基因
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