免疫学技术在国内外的应用已日趋广泛。近年来,它已从早年应用于微生物学发展到应用于生物医学研究的许多方面,包括各种免疫活性细胞及其众多的
细胞因子的研究,蛋白、
核酸和酶的研究。各种激素和各类药物半抗原的检测,以及寄生虫学、病理学和临床各科的研究。目前,它已成为新兴学科
分子生物学和细胞生物学研究的重要工具之一。
简单介绍以下几种免疫学应用技术:免疫印迹技术、放射免疫技术、免疫酶技术、免疫荧光定位技术、免疫胶体金技术、细胞免疫技术等。
1. 免疫印迹技术
将用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE分离得到的按分子量大小排列的非标记蛋白转移到固相载体膜上,再用标记的特异性的抗血清或
单克隆抗体对蛋白质进行定性及定量分析的技术,如Western blot,其鉴定蛋白质的敏感性约为1—5ng。
用于检测可溶性抗原、细胞成分的鉴定与分析,检测与自身变性
细胞核成分结合的抗体(
抗核抗体),HIV的明确诊断。
2. 放射免疫技术
用放射性同位素标记抗原或抗体进行的免疫测定。既有同位素的敏感性又有抗原抗体结合的特异性,同时具有重复性好、准确性高、标本用量少等优点。广泛应用于激素、药物等微量物质的检测。
3. 免疫酶技术
将抗原—抗体反应的高度特异性与酶对底物的高效催化作用有效地结合起来,通过酶分解底物产生有色物质(也可作用于荧光底物,产生荧光),肉眼观察颜色深浅或
酶标仪测定光密度值(OD),以反映抗原或抗体的含量。如ELISA,ELISPOT等。
本法灵敏度高,通常用于检测可溶性抗原或抗体、组织或细胞表面特异性抗原。
4. 免疫荧光技术
用荧光素标记一抗或二抗,检测特异性抗原或抗体的方法。常用的荧光素有异硫氰酸荧光素(nuoresceinisothiocyanate,FITC)、藻红蛋白(phycoerythrin,PE)等。在激发光的作用下,可直接发射荧光,前者发黄绿色荧光,后者发红色荧光。
5. 免疫胶体金技术
利用氯金酸(HAuCl+)在还原剂作用下,产生分散状态的胶体金颗粒的性质。在碱性条件下,金颗粒表面带负电荷,与蛋白质正电荷基团结合。胶体金可标记白蛋白、
免疫球蛋白、糖蛋白、激素、脂蛋白、植物血凝素、卵白素等。大分子以单层形式吸附在金颗粒表面。不同还原剂作用于氯金酸,产生的胶体金粒径大小不相同(5—50nm),小粒径的胶体金由于穿透性好,电子密度高,常被用于免疫电镜技术。这些小粒径的金颗粒,经银显影液处理后,金粒子还原银离子生成银颗粒而吸附在金颗粒周围呈黑褐色,从而放大了金颗粒的显色效果,又称免疫金银法。胶体金颜色随颗粒大小而变化,大于20nm的金颗粒在光镜下呈现砖红色,可在光镜水平行免疫分析,也可用银显影剂增强,进一步提高灵敏度。当胶体金的粒径较大、浓度密集时肉眼水平即可观察,即胶体金斑点渗滤试验和胶体金斑点免疫层析试验。
6. 细胞免疫技术
用于
免疫细胞的分离:有
磁珠分离法•fluorescence-activated cell sorter,FACS
用于免疫细胞功能的测定:
T细胞(1. 使用酶、免疫荧光标记
单抗进行鉴定 2. 淋巴细胞转化试验 3. E花环形成试验 4. 混合淋巴细胞培养 5. CTL介导的细胞毒试验),B细胞(1. 检测B细胞分化抗原 2. 测定B细胞产生抗体的能力 3. 溶血空斑试验 4.ELISPOT)
用于检测细胞因子:1.生物活性检测(细胞增生或增生抑制法•细胞病变抑制法•趋化作用测定法)2. 免疫学检测法 3. 分子生物学技术
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