双缩脲比色法测定蛋白质含量偏高是什么原因？

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第1个回答 2014-09-13

干扰物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等

极有可能蛋白质被降解

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双缩脲法测定蛋白质的含量实验分析与讨论怎么写答：双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA。双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时，试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫...

双缩脲法测定蛋白质答：双缩脲法测定蛋白质如下：双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。鉴定反应蛋白质单位1...

双缩脲法测定蛋白质含量答：双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物，在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色络合物，此反应即为双缩脲反应。含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲反应。 蛋白质含有多个肽键，在碱性溶液中能与Cu 2+ 络合成紫红色化合物。其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，可以用比色法进行测定。双缩脲法最...

双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有哪些答：1、碱性环境：在使用双缩脲试剂时候，必须注意，必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液，再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。若先加入硫酸铜溶液，再加入氢氧化钠溶液，则无法充分制造碱性环境，此时硫酸铜会与氢氧化钠发生复分解反应，生成蓝色氢氧化铜沉淀，导致现象不清，无法较好地达到实验目的。2、蛋白质...

双缩脲试剂检测蛋白质原理是什么?答：双缩脲试剂本是用来检测双缩脲，由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时，试液中的铜与多肽配位，络合物呈紫色。可通过比色法分析浓度。双缩脲法测定蛋白质的优缺点：优点：双缩脲法测定蛋白质的测定范围是1~10mg蛋白质，...

双缩脲法双缩脲法答：该方法基于原理，当双缩脲在强碱性溶液中与二价铜离子结合，会形成颜色深浅与蛋白质浓度正相关的络合物。这个反应适用于含有两个酰胺基或相连肽键的化合物，且颜色变化与分子量和氨基酸成分无关，因此适用于快速且相对较少干扰的蛋白质含量测定。尽管双缩脲法具有优点，如反应快速、颜色深浅相近，干扰物质...

双缩脲试剂检测蛋白质原理是什么?答：用来检测双缩脲，由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时，试液中的铜与多肽配位，络合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/mL。双缩脲试剂检测蛋白质评价：优点：...

双缩脲法与folin酚法测定蛋白含量的准确性的如何?答：这两种显色反应产生深蓝色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。 Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色（钼兰和钨兰的混合物）。在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比。这个测定法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多...

双缩脲法蛋白质定量有什么优缺点?答：不同蛋白质产生的颜色深浅相近。缺点：①灵敏度差； ② 三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等会干扰该反应。双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。

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