第1个回答 2012-03-28
LD同工酶琼脂糖凝胶电泳
1.原理：
LD同工酶在一定的电泳条件下在支持物上被分离后，以乳酸钠为底物，NAD+作受氢体，LD催化乳酸脱氢生成丙酮酸，同时使NAD+还原成NADH，NADH将氢传递给酚嗪二甲酯硫酸盐（PMS），PMS又将氢传递给氯化碘代硝基四氮唑盐（INT），使其还原成紫红色甲臜化合物。当有LD活性的区带存在即显紫红色，颜色深浅与酶活性成正比，用光密度扫描仪扫描区带定量。
蛋白质电泳
1.原理
蛋白质分子在溶液中由于其末端氨基、末端羧基及侧链的游离基团而成为带电颗粒，并可在电场内移动，其移动方向取决于蛋白质分子所带静电荷。不同蛋白质分子根据其氨基酸组成及所在溶液的pH值，携带的静电荷不尽相同，致使它们在电场中的迁移率各异，从而达到分理的目的。
现在普遍采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），包括非变性电泳(native PAGE)和SDS-PAGE两种，前者主要是在分离蛋白复合物时经常用到。后者是在凝胶与缓冲系统中加入阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS），蛋白质分子被大量SDS阴离子包裹，消除了它们间原来携带的电荷差别，因而其迁移率仅反映蛋白质分子大小，故广泛用于蛋白质分子量的测定。