牛流行热进行血清学诊断的方法：
为检测、诊断和控制本病，从20世纪60年代至今，国内外的研究者对本病在特异性诊断方法方面进行了大量的研究工作，如补体结合试验、免疫荧光技术、ELISA、阻断ELISA及中和试验。迄今国内外的研究结果表明，用补体稀释法的补体结合试验，因V、C列差小而不易掌握；免疫荧光和ELISA技术，由于判读因素及阴、阳性血清OD值比值小，也限制了它们在BEF诊断上的实际应用；在血清中和试验中，固定血清，稀释病毒的乳鼠脑内接种法，虽较敏感，但耗费人力、物力和时间；固定病毒，稀释血清的细胞培养常量法比微量血清中和试验稍敏感些，但微量法具有操作简便，节省人力、物力、时间和设备的优点，所以它是目前公认的一项快速、实用的诊断BEF的血清学方法。
微量血清中和试验操作方法
1.1材料准备
1.1.1器材
滴定板：无菌带盖的96孔微量聚苯乙烯塑料滴定板（简称微量板）；
加样器：25μl、50μl及100μl单道和多道加样器；加样塑料滴头，装量为25～100μl，与加样器配套使用。
二氧化碳培养箱。
标准阳性血清、阴性血清、被检血清，于使用前均须56℃30min灭能。
1.1.2细胞培养与传代
从液氮中取出冻存的BHK21细胞安瓿1支，置37℃水浴全融后，迅速开封，立即移入装有10ml生长液的100ml方瓶内，放37℃下静置培养一夜，换同量生长液继续培养，经48～72h形成良好单层后，倒掉生长液，以含0.05%胰酶、EDTA（简称ATV）液4ml消化，待细胞单层疏松拉网时，用吸管贴壁反复吹打数次，制成均匀散在的细胞悬液，加入0.4ml无菌犊牛血清混匀，以终止ATV对细胞的作用。然后1000r/nim离心10min，细胞沉淀按1∶4分种率传代。
1.1.3细胞计数
进行BEF微量法中和试验时，加到微量板96孔内的细胞总数为3×106个，每孔约30000个细胞。细胞计数的具体方法是：将发育良好的方瓶单层细胞，按上项4.1.2方法消化、离心处理后，制成4ml细胞悬液，取该悬液0.1ml加生长液9.9ml混匀，以毛吸管吸取少量细胞悬液加入到白细胞计数板的计算室内，在显微镜下观察并按
3/四大区平均细胞=X
取Xml上述细胞悬液加生长液到10ml混匀即含3×106个细胞。
1.1.4病毒液的制备及毒价测定
1.1.4.1病毒液制备在方瓶细胞形成良好单层后倒液，接入用维持液稀释100倍的BEF病毒2ml，置37℃吸附1h，倒液再加与生长液等量的维持液，重置37℃下静置培养48～72h，逐日观察CPE，当CPE达75%以上时收毒，反复冻融3次后，置-40℃以下保存。
1.1.4.2病毒TCID50的测定
A.用加样器向微量板的每孔各加100μl经计数的细胞悬液（每孔30000个细胞），然后置37℃下孵育3～4h。
B.用生长液将病毒做10倍系列稀释，直至10-7。
C.用加样器将各稀释度的病毒从高稀释度到低稀释度顺序依次分别加入各孔，每一稀释度4孔，每孔25μl，直至同时设不接毒的细胞对照4孔。
D.将微量板合上灭菌盖，置入含有少量水分棉球的薄塑料袋内，用线绳轻轻结扎袋口，然后置含5%CO2培养箱内37℃下静置培养3～5d。从第三天起，逐日观察微量板各孔的CPE，在对照排4孔细胞正常情况下，进行TCID50的终点计算（计算方法见表2）新鲜病毒的TCID50不得低于10-6/ml。
1.1.4.3100TCID50的测定和计算方法本方法是按中国、澳大利亚科技合作项目（8455）执行过程中建立的，其测定和计算的具体步骤如下：首先将受检抗原（病毒液）做10倍、50倍稀释，前者称A液，后者称B液，同时对A、B液进行毒价测定。如A液的毒价是3.5；B液的毒价是2.75，则取（3.5-2.75）÷4=0.19作为系数，然后用A液的毒价值顺次减去系数值（表8-1），当所得的差等于或接近2时的病毒稀释度即为工作病毒用量（100TCID50）。
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