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westernblot结果怎么看
western结果怎样
统计分析
答:
westernblot结果
的分析是一个主观性比较强的过程western是一个半定量的实验。所以一般是作为定性的验证试验首先要分析的就是有无目的蛋白的条带,有无条带就是一个定性的结果,这种分析是比较简单。一般就是方差分析、t检验之类的我替别人做这类的数据分析蛮多的。统计学是通过搜索、整理、分析、描述数据...
western blot
图中,IP IB Flag HA是什么意思
答:
从最右边看,表示细胞再转染了这三种质粒后,能够在细胞中表达,最左边的图是用带有Flag标签的VEGFR拉p85及其研究片段,从图中可以看出,p85被拉出,而其研究片段没有被拉出,中间的图是反过来用p85及其研究片段拉VEGFR,同样可以看出p85可以把VEGFR拉出,而其研究片段没有被拉出,结论是VEGFR与P85存在...
western blot
实验
结果怎么
分析?IP,IB都是代表什么意思?
答:
灰度扫描目标条带,与内参条带灰度值比较,进行标准化数据。根据比值绘制图表。IP=immunoprecipitation 免疫沉淀(富集样品或避免抗体同原材料中其他物质发生非特异反应)IB=immunoblotting 免疫印迹 (不一定是蛋白免疫印迹=
Western blotting
)
westernblot
内参GAPDH成功了
答:
1.蛋白测定之后要加5X SDS上样缓冲液,该
怎么
加呢?是所有的标本一起加了,还是就算准备上样的量?经中心试验室CWW指点后才知道,可以一起加了。就是把蛋白样品的体积除以4就是了,这样的5Xbuffer就变为了1X。2.紧接着是配胶,也是一堆问题。过硫酸铵(AP),给我的是一支0.5g干粉,说明书说...
如何
定量分析免疫组化和
western blot
的
结果
,求具体步骤
答:
使用对照组数据正常化
结果
,或与其他标记物进行比较。二、
Western Blot
定量分析:1.获得图像:使用胶片或数字成像系统捕获Blot图像。2.选择合适的软件:如ImageJ、Quantity One等进行图像分析。3.背景减去:选择一个没有条带的区域作为背景,使用软件减去背景。4.条带定量:使用软件工具选择每个条带,并测量其灰度值。5....
做实验 | 选对
Western Blot
内参抗体,实验成功一半!
答:
Western Blot
是蛋白表达研究的常用手段,但操作过程中的误差可能影响
结果
。通过内参,可以校正总蛋白浓度和上样过程中的偏差,确保定量分析的可靠性。选择内参时,要考虑样本的物种来源、目的蛋白的分子量以及表达部位。例如,哺乳动物细胞通常选择β-actin,植物样本则选plant actin,而核蛋白检测则需核内参如...
做好
westernblot
需要注意各种细节,转给需要的你!
答:
我最开始也是在暗室中显影,后来用Bio-rad凝胶成像系统照相,对比
结果
发现后者的结果更加清晰明显,背景也更加干净,之后就一直用成像仪曝光照相了。 2.夹取胶片可用普通镊子,但也只夹胶片左上角,避免损害胶片上曝光的蛋白条带。 3.胶片左上角maker一侧一定要剪一小角或做其它标记,才可在显影后明显对应各个样品。 4...
为什么
western blot结果
中,蛋白质检测分子量会与计算大小不同
答:
也就是说如果目的蛋白在SDS-PAGE上检测
结果
是分子量偏大的,那么在
Western blot
转膜后也会是偏大的,这和目的蛋白的结构(糖基化修饰),电泳迁移率,缓冲液组成等等都有关系。所以只是一个相对的分子量的结果。要精确检测目的蛋白的分子量结果需要做质谱(MS)检测 ...
WesternBlot
基本原理及步骤
答:
WesternBlot
基本原理及步骤如下:
Western blot
即蛋白质印迹法(免疫印迹试验),它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现已广泛应用于基因...
Western blot
实验最常见的10个问题及解决方案
答:
Westernblot
显色的方法主要有以下几种:(1)放射自显影,(2)底物化学发光ECL,(3)底物荧光ECF,(4)底物DAB呈色。现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色。大部分Westernblot显色底物是化学发光底物,发表文章通常也是用底物化学发光ECL 2、目的蛋白信号弱或无 在Westernblot发光检测中常见的问题...
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