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western blot显影
Western
blot
实验最常见的10个问题及解决方案
答:
Westernblot
显色的方法主要有以下几种:(1)放射自
显影
,(2)底物化学发光ECL,(3)底物荧光ECF,(4)底物DAB呈色。现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色。大部分Westernblot显色底物是化学发光底物,发表文章通常也是用底物化学发光ECL 2、目的蛋白信号弱或无 在Westernblot发光检测中常见的问题之...
western
blot
原理
答:
Western
blot
原理如下:Western blot是一种常用的蛋白质分析技术,通过将目标蛋白从复杂的混合物中分离并定量检测,以确定蛋白质的存在与表达水平。Western blot技术包括样品制备、蛋白质分离、转移到膜上、蛋白质检测和分析等步骤。一、样品制备与蛋白质分离 首先,需要从细胞或组织中提取目标蛋白,通常使用...
western
blot显影
答:
第一,可能是放射时间过长 第二,可能压片时已经曝光 第三,看看你的灯是不是漏光(我们曾经遇到过)第四,
显影
时间不易长,十秒至二十秒,只要看到影子立即定影,不要在定影前长时间对着灯观看,因为此时也在显影 第五,保证你们的X胶片是进口的(高质量的),有些劣质产品极其糟糕 第六,最重要的...
western
blot 显影
是多条带,什么原因,怎么处理
答:
可能有多种原因:抗体浓度过高,建议降低抗体浓度;SDS造成非特异性结合,建议转膜结束后清洗膜,免疫反应过程中避免使用SDS;二抗试剂的非特异结合,建议更换二抗;一抗特异性差,采用单抗或亲和纯化的抗体 ;样品制备有问题,稳定性差,使得样品发生降解。
western
blot
在加荧光剂后,
显影
定影的时间及具体操作?多谢大侠!_百...
答:
可以依据最初看到的荧光亮度大概判定压片时间。一般可以看到明显的荧光条带,先压三十秒。
显影
时,要把胶片完全浸入显影液,可以用透明的或者白色的盒子,可以看到显影,当看到胶片上有黑色条带,基本上显影可以了。多放个几秒钟,可以捞出来了,过下清水,放定影液里就可以了。如果你觉得显影的条带过浓...
做
Western
blot
时,mark 蛋白
显影
吗?
答:
做
western
时marker是染不上色的,因为其不与抗体反应。你可以在
显影
完后,把PVDF用考染法染一下色即可看到marker的条带,然后用膜与底片对照即可。
Western
Blot
原理技术
答:
Western
blot
(蛋白印迹)WB是一种把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持物(NC膜或PVDF膜),并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测。WB采用抗体作为探针,抗体可以与附着在固相支持物的靶蛋白的抗原表位发生抗原-抗体免疫反应。这种技术的作用是对细胞或组织提取的蛋白混合物(即总蛋白混合物)...
生物科研实战——
Western
blot
答:
不仅省时省力,而且可以消除重新上样而带来的误差,使可比性更强。(1)将
显影
完的PVDF膜置于汉恒生物一抗二抗去除液中漂洗10min,室温摇床 (2)弃除一抗二抗去除液并吸尽残余液体加入TBST漂洗3次,每次5min (3)Strip完成后可再次进行封闭、一抗二抗孵育等
Western
Blot
操作 ...
做
Western
blot
时,mark 蛋白
显影
吗?
答:
有的marker是可以发荧光的,所以能
显影
,而不能发荧光显色的绝大多是因为和2抗交叉反应导致的
western
-
blot
实验步骤
答:
Western
,也称Western blot、Western
blotting
、Western印迹,是用抗体检测蛋白的重要方法之一。可按照以下步骤操作。1.收集蛋白样品(Protein sample preparation)使用细胞裂解液,对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品的蛋白浓度。2. 电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝胶配制 SDS-PAGE...
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