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sds聚丙烯酰胺和聚丙烯酰胺
聚丙烯酰胺
凝胶作为电泳支持物,有何优缺点?
答:
蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离. 2. 根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法:还原
SDS
处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理. 3.
聚丙烯酰胺
的作用:
丙烯酰胺与
为蛋白质电泳提供载体,其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否,与促凝剂及环境密切相关.4. 出现拖尾现主要是样品融解...
二维
聚丙烯酰胺
凝胶电泳的原理
答:
而后将凝胶从管中取出,用含有SDS的缓冲液处理30 min,使
SDS与
蛋白质充分结合。将处理过的凝胶条放在SDS-
聚丙烯酰胺
凝胶电泳浓缩胶上,加入丙烯酰胺溶液或熔化的琼脂糖溶液使其固定并与浓缩胶连接。在第二维电泳过程中,结合SDS的蛋白质从等电聚焦凝胶中进入SDS-聚丙烯酰胺凝胶,在浓缩胶中被浓缩,在...
SDS
-
聚丙烯酰胺
凝胶原理
答:
SDS
使蛋白质变性,变成条状分子。消去了分子形状差异。在胶中的移动速度取决于电压和分子量大小。不同浓度
聚丙烯酰胺
孔径不同。浓度大的交联程度大,孔径小,分离的分子小。分子量大的跑得慢,分子量小的跑得快。染色脱色,紫外观察。根据条带可知有几种蛋白。根据marker还可知道蛋白的分子量。
SDS聚丙烯酰胺
凝胶电泳的注意事项
答:
1.SDS与蛋白质的结合按质量成比例(即:1.4g SDS /g蛋白质),蛋白质含量不可以超标,否则SDS结合量不足。2.用
SDS聚丙烯酰胺
凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时,必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。并且sDs—PAGE 测定分子量有10%误差,不可完全信任。3.有些蛋白质由亚基(如...
SDS
-
聚丙烯酰胺
凝胶电泳中,当分离较小分子量的蛋白质时,应如何控制胶的...
答:
聚丙烯酰胺
,俗称3#絮凝剂,溶于水中带正电。浓度不宜过高,否则溶液因絮凝剂浓度过高而显粘稠。
sds
-page和native-page有什么不同?
答:
一、主体不同 1、
sds
-page:是以
聚丙烯酰胺
凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。2、Native-PAGE:是在不加入
SDS
和巯基乙醇等变性剂的条件下,对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。二、作用不同 1、sds-page:用于分离蛋白质和寡核苷酸。2、Native-PAGE:用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。三、...
SDS
-
聚丙烯酰胺
凝胶电泳 上下槽电极缓冲液用过一次后,是否可混合再用...
答:
不能。原因如下:电泳的过程中,电极缓冲液中的水分会被蒸发,导致里面的离子浓度升高。加之电解过程中是对里面水的电解,也引起水的减少。离子强度过大,会影响到蛋白质的活性,使电泳速度减慢,条带不清晰。血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳与滤纸相比较,有以下优点。醋酸纤维素薄膜对蛋白质样品吸附极少,无“...
SDS聚丙烯酰胺
凝胶电泳的实验步骤
答:
这些离子存电泳时都向正极移动。Cl一速度最快(先导离子),其次为蛋白质,Gly负离子最慢(尾随离子)。离子Cl一很快超过蛋白离子,因此存其后面形成一个电导较低、电位梯度较陡的区域,该区电化梯度最高,这是在电泳过程中形成的电化梯度的不连续性,导致蛋白质和G1y离子加快移动,结果使蛋白质在进入...
SDS聚丙烯酰胺
凝胶电泳的特性
答:
(1)在一定浓度时,凝胶透明,有弹性,机械性能好;(2)化学性能稳定,与被分离物不起化学反应,在很多溶剂中不溶;(3)对pH和温度变化较稳定;(4)几乎无吸附和电渗作用,只要Acr纯度高,操作条件一致,则样品分离重复性好;(5)样品不易扩散,且用量少,其灵敏度可达10-6ug(6)凝胶孔径可调节,根据...
sds
-page与native-page的区别是什么?
答:
一、主体不同 1、
sds
-page:是以
聚丙烯酰胺
凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。2、Native-PAGE:是在不加入
SDS
和巯基乙醇等变性剂的条件下,对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。二、作用不同 1、sds-page:用于分离蛋白质和寡核苷酸。2、Native-PAGE:用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。三、...
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