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DNA纯化后的应用
Dna
胶回收实验中 binding buffer ,wash solution ,elution buffer的作 ...
答:
用binding buffer是为了增加洗脱柱对核酸的结合活性;wash solution是洗掉柱子里除核酸物质以外的杂质;而shuelution buffer就是最后把
DNA
从柱子上洗脱下来使用的溶液,一般是pH=8.0的TE,dd水也可以。如果不是马上使用DNA,可以将切下的胶放入离心管中-20度保存,这样可以保存更长时间,而且对DNA影响较...
DNA纯化
有哪些方法?
答:
1 氯仿/异戊醇
纯化
,乙醇沉淀法 2 玻璃奶纯化法 3 硅胶柱纯化法。
内含肽的分离
纯化
答:
内含肽在蛋白质
纯化
中
的应用
修饰后(位点特异性突变)的内含肽经诱导能够介导N端或C端单侧肽键断裂。首先将编码亲和标签、内含肽及目标蛋白的基因序列连接在一起,在合适的宿主系统中表达出一个标签-内含肽-目标蛋白的三联体,利用修饰
后的
内含肽构建的蛋白纯化载体可以将目的蛋白直接融合表达于内含肽的N端或C端,...
质粒
DNA纯化的
溴化乙锭溶液的净化处理
答:
亚硝酸钠,混匀。【检测该溶液的pH值应小于3.0。市售次磷酸一般为50%溶液,具有腐蚀性,应小心操作,必须现用现稀释。亚硝酸钠溶液(0.5mol/L)
应用
水溶解34.5g亚硝酸钠并定容至终体积500ml,现用现配。】3、 于室温温育24h后,加入大大过量的1mol/L碳酸氢钠。至此, 该溶液可予丢弃。
RNA提取后有必要用
DNA
酶处理吗
答:
比如用QIAGEN的RNase-free的DNase处理的,不是加了DNase就结束了,为了去除DNase(蛋白)和buffer等可能影响到后期操作的因素,所以酶解了
DNA后
必须
纯化
RNA(QIAGEN的纯化柱),这样得到的RNA才用于定量实验。即使这样,在做real-time PCR时都要加一管仅加RNA的作为阴性对照(排除
DNA的
污染)。
为什么电泳技术可以
纯化
目的
DNA
答:
还有带的电荷不同而受到的引力不一样,所以有的分子跑的快有的跑的慢)来
纯化的
。。
DNA
带负电的,因为磷酸基带负电,所以不同的DNA片段形状啊,大小啊,电荷不同就分离了,跑电泳的时候应该会有个standard的给你,跑完
之后
会有像标尺一样的作用,就知道自己的DNA差不多大小是多少了。
需要大量
纯化
细胞表达的重组蛋白,但有
DNA
残余,怎么去除DNA影响
答:
加点核酸酶溶解掉核酸,我们实验室蛋白
纯化
都是用柱子纯化,没有用过滤的,而且过滤的话纯化效果应该很差,杂质太多
纯化dna的
方法有哪些
答:
10 mmol/L Tris·HCl(pH 8.0),1 mmol/LEDTA(pH 8.0),配制完成后高压灭菌,4 ℃保存。【实验步骤】1、在待
纯化的DNA
溶液中加等体积的酚:氯仿:异戊醇混合液,然后在涡旋混匀器上充分混匀。2、将混合物12000 r/min离心10 min后,移取上层含
DNA的
水相到另一离心管中。如果在水相和...
生化PCR名词解释
答:
微生物复制是一个费时耗力的流程,首先要将
DNA
经限制酶剪裁,再利用连接酶(Ligase)加到运载体(Vector)中,
之后
利用瞬间电击(Electroporation)或是热休克(HeatShock)的方式,送到大肠杆菌感受态细胞(competentcell)中;将此菌于培养皿大量繁殖培养,再经过繁复的分离、
纯化
过程,时间通常需要近一周,...
多糖的
纯化
方法与哪些
答:
多糖
纯化
:a、分部沉淀法:根据各种多糖在不同浓度的低级醇或丙酮中具有不同溶解度的性质,逐次按比例由小到大加入甲醇或乙醇或丙酮,收集不同浓度下析出的沉淀,经反复溶解与沉淀后,直到测得的物理常数恒定(最常用的是比旋光度测定或电泳检查)。这种方法适合于分离各种溶解度相差较大的多糖。为了多糖...
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