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质谱检测蛋白质步骤详细
国家标准
检测蛋白质
含量测定方法
答:
国家标准检测蛋白质含量的方法叫做凯氏定氮法
,食物中的蛋白质在催化加热条件下分解,导致氨和硫酸结合产生硫酸铵。 碱蒸馏采用无硫,硼酸吸收,用硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定,根据酸耗计算氮含量,再乘以转化系数,即蛋白质含量。具体操作步骤如下:1.样品处理 精确称量0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体...
蛋白质质谱
分析
具体
流程
答:
胰蛋白酶溶液在4℃放置45—60min使胶粒再水化,加入1O一2o 碳酸氢铵溶液覆盖胶粒
,37cI=保温1小时后,放置过夜,所得溶液供质谱分析用。3.2 电洗脱后在溶液中酶解 电洗脱是电泳后从凝胶上回收蛋白质的经典方法。通常蛋白质量多于0.O01 mmol。将含SDS的凝胶与MALDI TOF MS分析结合,可分析亚mmol的蛋白质。Schuh...
说明常用
蛋白质测定
方法的原理,并对各种方法加以比较
答:
双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法
,硫铵不干扰显色, Cu2+与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成紫蓝色络合物,此物在540nm波长处有最大吸收。利用标准蛋白溶液和双缩脲试剂绘制标准曲线,将待测血清与硫酸钠在待测试管中混合,并只加入硫酸钠不含血清的试管作对照,将两支试管加入...
蛋白质
组学测序技术是什么方法?
答:
分析步骤:样品准备:包括蛋白质的提取、纯化和量化
。蛋白质分离:常用的方法有二维凝胶电泳(2-DE)和液相色谱(LC)。蛋白质鉴定:主要通过质谱(MS)技术实现。数据分析:使用生物信息学工具和数据库比对,进行蛋白质鉴定、定量和功能注释。蛋白质组学测序技术是一种综合性的技术手段,通过质谱法、蛋白...
3.
蛋白质谱
的原理及使用(2)
答:
如果我们把质荷比都算错了,我们是很难鉴定到正确的
蛋白
的。 下面这个图也能很直观地告诉我们
质谱检测
高分辨率的优势。 比如说,我们用17,500的分辨率来对一个化合物进行扫描,会发现在质荷比在280.09的这个位置,有一个非常胖的质谱峰(第一张谱图红色圆圈标记),我们可能会认为这是一个化合物,于是就开始对这个...
3.
蛋白质谱
的原理及使用(1)
答:
第一张是正丁烷的谱图,横轴质荷比的取值范围是从10-60。另一张是代谢物
质谱
图,横轴质荷比是100-400。那些小柱子就是信号峰了。 接下来,我们要聊的问题就是:质谱仪是如何获得这些质谱图? 前面说了,质谱只能
检测
离子,所以要得到质谱图,首先我们要获得离子。离子分为两类:正离子和负离子,那么对应的,它们带正...
什么是
蛋白质
组学?简述二维电泳(2-DE)和
质谱
(MS)技术在蛋白质组学研究...
答:
目前
蛋白质
组学研究在表达蛋白质组学方面研究的最为广泛,其分析通常有三个
步骤
:第一步、运用2-DE技术分离样品中的蛋白质;第二步、应用
质谱
技术或N末端测序鉴定2-DE分离的蛋白质;第三步、应用生物信息学技术存储、处理、比较获得的数据。(1)2-DE(Two-dimensional gel electrophoresis,双相凝胶...
质谱
仪是怎么
测蛋白质
序列的,过程是什么??
答:
基本过程是将
蛋白质
被打成单电荷片段,通过电磁偏转得到一系列长度不等的片段,由于可测得质量,将片段排序,就可知道某个位点的氨基酸的质量,进而得知氨基酸的种类,重复此过程,可得知所有氨基酸的种类,进而得知蛋白质的序列,一般都是以及序列的信息,毕竟蛋白质测序之前要经过预处理。
质谱
搜库后如何找到需要
蛋白质
的物质?
答:
在
质谱
搜库之后,可以通过以下几个
步骤
来确定需要
蛋白质
的物质:1、确认鉴定出来的蛋白质名称和序列:根据质谱数据的分析结果,可以获取到序列覆盖率、肽段数目、质量误差等参数,以及质谱匹配得分。进一步将这些鉴定出来的蛋白质名称和序列与数据库中的注释信息进行比对,确认蛋白质的基本信息。2、确认蛋白质...
如何
测定蛋白质
分子量?
答:
测定蛋白质
分子量的常用方法:粘度法、凝胶过滤层析法、凝胶渗透色谱法、SDS-凝胶电泳、渗透压法、
质谱
法包括电喷雾离子化质谱技术和基质辅助激光解吸电离质谱技术、光散射法(多角度激光散射)、沉降法(超速离心法)。1、粘度法 一定温度条件下,高聚物稀溶液的粘度与其分子量之间呈正相关性,随着分子量的...
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