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蓝白斑筛选阴性是什么颜色
一学生用
蓝白斑
做阳性克隆
筛选
,因为疏忽没有在选择性培养基中添加X-gal...
答:
1
不是。因为没有生色底物,阴性菌落虽然可以表达lacZ,但无法显色
。2 全部转接至含X-gal的新鲜选择培养基上,培养后看是否为白色。要么以pcr法对所有菌落作鉴定。或者所有菌落转接至液体培养基扩增后抽质粒,看质粒大小。
如何用标记基因检测目的基因导入载体
答:
一般标记基因的DNA序列是已知的,若选用抗氨苄青霉素基因,则可在目的基因导入后用氨苄青霉素来处理受体细胞,若无异常,则抗氨苄青霉素已合成,说明基因已得到表达。标记基因的作用在于便于检测目的基因的情况。因为标记基因和目的基因同位于运载体上,要导入都导入,要表达则都会表达。检测分三种,首先是通过...
蓝白斑筛选
假
阴性
答:
由于没有β-半乳糖苷酶的酶解作用,致使重组菌形成白色菌落。由此,可以借助
蓝白斑
很容易
筛选
出重组子.不过实际操作中发现当插入小片段时,重组子也有形成浅蓝斑的情况.即蓝色菌斑也有可能含外源基因。据最新报道,大概有30%的假
阴性
.参考资料:http://life.hbu.edu.cn/image/10075_3_e_1.pdf ...
蓝白斑筛选
答:
这种lacZ基因的突变特性体现在其缺失近操纵基因区段,当与带有完整操纵基因的
阴性
突变体结合时,能够实现互补,即α-互补现象。
蓝白斑筛选
的过程依赖于α-互补产生的Lac+细菌。在含有生色底物X-gal和IPTG的培养基中,Lac+细菌会形成蓝色菌落,因为它们在IPTG诱导下产生蓝色的β-半乳糖苷。然而,如果外源...
蓝白斑筛选
结果相反是为
什么
答:
这个好像是分子生物学课后习题嘛!前面那是是假
阴性
,由于插入目的片段太短,报道称有30%的假阴性,但为
什么
会有60bp的小片段,多数是实验过程中的污染,也有可能是基因组被酶切的小片段。后者是假阳性,即在载体与插入片段连接前,载体末端被核酸酶酶切掉一点,被轻微降解的载体然后自连接,被轻微降解...
蓝白斑筛选
答:
这种lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酸
阴性
突变体之间实现互补的现象叫α-互补。
蓝白斑筛选
的机理 由α-互补产生的Lac+ 细菌较易识别,它在生色底物X-gal(5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)下存在下被IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)诱导形成...
什么
是α-互补
答:
α-互补,总的一句话,其用途是通过蓝白
筛选
鉴别重组子和非重组子。实验中,白色的是重组子,蓝色的是非重组子。知道这一点,对非基础医学研究的人已足够了。 大肠杆菌的lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酸
阴性
突变体之间实现互补的现象叫α-互补。
GFP
筛选
原理
答:
这种重组子的筛选,又称为
蓝白斑筛选
。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后,有重组质粒的细菌形成白色菌落。筛选氨苄青霉素抗性的阳性克隆很简单,将氨苄青霉素加到所用培养基中,终浓度100ug/ml,把要筛选的菌液涂布其上,能长出的就是氨苄青霉素阳性菌株。要注意的...
...基上实验组和
阴性
对照都没有菌落出现,这
说明什么
?原因
是什么
_百度知 ...
答:
供体菌相应位点的染色体没有交换到受体菌上,而且受体菌本身不能被该选择性培养基选择,可以再做一组供体菌的对照试验,看看能不能生长,这种转化本身发生频率就很低,样本一定要多。用的是
蓝白斑筛选
,白斑为插入目的基因片段的转化子,蓝斑则没有,挑取白色单菌落摇菌进行pcr检测验证。百度蓝白斑筛选。
菌落PCR做了10次还是不成功···
答:
2,设
阴性
对照以及阳性对照(用有目的片段的质粒或菌为模板),如果阳性对照能出来,而你还没p出来,就说明你的菌里没目的片段。3,你的片段为1.3kb,如果你用的是普通taq的mix,那么你的延伸要设90s或100s才够,退火温度将梯度设在52-60℃。酶离子就别多加了。此外,检查你的平板是不是太长...
1
2
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