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常用的核酸探针非放射性标记物有
核酸的标记物有
哪些
答:
(3)荧光素:如FITC、罗丹明类等
,可以发出紫荧光进行观察,主要适用于细胞原位杂交。(4)化学发光探针:一些标记物可与某种物质反应产生化学发光现象,通过化学发光可以像核素一样直接使X线胶片上的乳胶颗粒感光。化学发光探针可能是今后非核素标记物研究的主要方向。
杂交分子杂交的类型
答:
杂交分子技术在核酸探针分类中有多种类型,主要分为放射性探针与非放射性探针。
放射性探针包括DNA探针(如双/单链DNA
,针对细菌/人类基因等)和RNA探针,而cDNA探针则是通过逆转录酶合成,用于基因克隆和表达。DNA探针因其持久性和标记方法的多样性而常用,如AMV逆转录酶合成的cDNA探针,常用于基因组DNA文...
常见
于
标记核酸探针的放射性
核素有?
答:
1.核素
标记物
放射性
核素是目前应用最多的一类探针标记物.放射性核素的灵敏度极高,可以检测到10-14~10-18克的物质,在最适条件下可以测出样品中少于1000个分子
的核酸
含量.
常用标记核酸探针
的核素有32P、3H、35S,在Southern印迹杂交中以“P最常用.还应根据标记方法的不同选择相应标记方位的核素,一般情...
核酸探针
的种类
答:
目前,许多实验室都致力于发展非放射性标记的探针。
目前应用较多的非放射性标记物是生物素(Biotin)和地高辛(digoxigenin)
。二者都是
半抗原
。生物素是一种小分子水溶性维生素,对亲和素有独特的亲和力,两者能形成稳定的复合物,通过连接在亲和素或抗生物素蛋白上的显色物质(如酶、荧光素等)进行检测。
生物素与地高辛
,有什么大的区别吗
答:
生物素(Biotin)和地高辛(digoxigenin)都是非放射性标记物是
。二者都是
半抗原
。生物素是一种小分子水溶性维生素,对亲和素有独特的亲和力,两者能形成稳定的复合物,通过连接在亲和素或抗生物素蛋白上的显色物质(如酶、荧光素等)进行检测。地高辛是一种类固醇半抗原分子,可利用其抗体进行免疫检测,原理...
寡核苷酸探针
的
非放射性标记
答:
5.寡核苷酸的酶促加尾
标记
法在末端转移酶的作用下,用
非放射性物质
修饰的核苷酸(生物素dATP;生物素-dUTP;地高辛-dUTP)可加到DNA的3’末端,每个
探针
DNA可加上10~20个修饰碱基。(1)取-0.5ml硅化塑料离心管,插入冰浴中,加入寡核苷酸(3pmol)×μl,5×加尾缓冲液20μl,5.0mmol/l dUTP...
探针的标记
方法有哪些?
答:
分子杂交的准确性和探针长度有很大关系,长片段探针(数百核苷酸)能提供精确的鉴定结果,而人工合成的短片段探针(如20至30个核苷酸)可能导致准确性下降。
非放射性标记探针
,如碱性磷酸酶标记或生物素
标记的探针
,正在推动分子杂交在临床医学中的广泛应用,减少放射性
物质
的使用,提高了检测的便利性和安全...
非放射性
Dig-dUTP[操作]
答:
标记探针
步骤如下:在一个冰上放置的微型离心管中,依次加入新鲜变性DNA(1μg)、六聚核苷酸混合物(2μl)、标记过的dNTP混合物(2μl)、DNA聚合酶大片段(1μl),然后在37℃条件下反应1至20小时。反应结束后,加入EDTA终止,再用4mol/L LiCl和乙醇沉淀DNA,冷藏处理后真空干燥,最后用TE溶液...
寡核苷酸探针
的最大的优势是
答:
,使得这种探针价格低廉,与克隆探针一样,
寡核苷酸探针
能够用酶学或化学方法修饰以进行非放射性标记物的标记。尽管克隆探针较特异,但通过细心筛选序列和/或选择相对长的序列(>30nt)亦可设计出非常特异的寡核苷酸探针。最常用的寡核苷酸探针有18~40个碱基,合成仪可有效地合成至少50个碱基的探针。
FISH检测主要是检测什么
答:
FISH检测主要是检测基因或序列的染色体定位,也可用于未克隆基因或遗传
标记
及染色体畸变的研究。在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。FISH(fluorescence in situ hybridization)技术是一种重要的
非放射性
原位杂交技术。它的基本原理是:如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用
的核酸
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