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大肠杆菌 质粒
如何提高
大肠杆菌质粒
产量?
答:
4,RNA污染:一般在溶液1中,要加入Rnase,如果酶活性不好,会有Rna污染;5,乙醇没去除干净:在70%乙醇洗后,要再次离心去乙醇,如果忽视了这一步,残余的乙醇会极大的降低
质粒
产量;6,洗脱buffer的选择:最好用TA等试剂盒自带的洗脱buffer洗脱质粒,如果用纯水,现在的纯水仪的纯水都偏酸,也会降低产...
大肠杆菌质粒
提取过程中,哪一步最关键?
答:
p1:葡萄糖使悬浮后的
大肠杆菌
不会快速沉积到管子的底部;EDTA是Ca²⁺和Mg²⁺等二价金属离子的螯合剂,其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性;可添加RNase A消化RNA。p2:此步为碱处理。其中NaOH主要是为了溶解细胞,释放DNA,因为在强碱性的情况下,细胞膜...
如何提取
大肠杆菌质粒
DNA?
答:
碱裂解法通常有大量提取法和小量提取法,其提取原理是一样的,只需体积按一定比例扩大。纯化
质粒
DNA时通常还利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。开始进行克隆时,对于小量制备的质粒DNA,经过苯酚、氯仿抽提。RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA,所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化...
线性
质粒
可以转入
大肠杆菌
嘛
答:
可以。线性
质粒
是一种可以在细菌中复制的DNA分子,具有自我复制的能力。
大肠杆菌
是一种常用的受体细胞,可以接受外源基因的转入。因此线性质粒可以作为载体,将外源基因导入大肠杆菌中。
有关
大肠杆菌质粒
载体的构建策略包括哪些
答:
1、克隆
质粒
载体的构建:首先将目的基因的编码序列与质粒载体的复制子序列连接,构建出重组质粒。然后通过转化将重组质粒导入
大肠杆菌
中,筛选出含有重组质粒的菌落。2、表达质粒载体的构建:将目的基因的编码序列与表达调控序列(如启动子和转录终止信号序列)连接,构建出表达质粒。然后将表达质粒导入大肠杆菌...
大肠杆菌
都有
质粒
吗?
答:
一般的话,存在自然界的
大肠杆菌
自身都带有
质粒
,质粒编码非细菌生命所必须的某些生物学性状,如性菌毛、细菌素、毒素和耐药性等。质粒具有可自主复制、传给子代、也可丢失及在细菌之间转移等特性,与细菌的遗传变异有关。但是大肠杆菌工程菌自身不带质粒。大肠杆菌中存在质粒不一定都具有抗性基因,但有...
大肠杆菌
有多少
质粒
,每个质幕蛞谎
答:
质粒
的大小一般在10kb左右,但是F 因子要大很多.是一个约 100kb 的质粒.它编码60多种参与复制、分配和接合过程的蛋白质(Willetts and Skurray,1987).虽然F因子通常以双链闭环DNA(1-2个拷贝/细胞)的形式存在,但它可以在
大肠杆菌
染色体中至少30个位点处进行随机整合(Low,1987).携带F因子的细胞,...
大肠杆菌
提取的
质粒
有哪三种构型
答:
在琼脂糖凝胶电泳中存在三条电泳条带,按照Marker的位置从大到小依次为:线性DNA,松散的环状DNA,超螺旋结构DNA(在松散环状DNA的基础上进一步盘曲折叠形成的紧致的环状DNA)其实这三种结构分子量相同,由于空间结构的差异导致在琼脂糖凝胶电泳中迁移率不同,因此出现三条条带。标准的
质粒
提取实验中只存在...
当
质粒
转化进
大肠杆菌
时,通过什么原理表达目的基因
答:
当
质粒
转化进
大肠杆菌
时,通过DNA复制原理表达目的基因。CaCl2对特定的大肠杆菌处理,制备感受态的细菌。这些细菌可使每微克超螺旋质粒DNA,如一些插入目的DNA片段的重组质粒,产生5×106~2×107 个转化的菌落。当质粒与这些大肠杆菌混合后,质粒粘附在大肠杆菌的表面,在42℃的温度时,大肠杆菌出现热休克,...
编码
大肠杆菌
的大肠菌素的
质粒
为
答:
【答案】:B 1.接合性耐药
质粒
又称R质粒,由两部分组成,即耐药传递因子和耐药决定因子(r因子)。2.编码有性生殖的质粒为致育性质粒,可编码产生性菌毛,介导接合。3.编码细菌毒力的质粒为Vi质粒,编码产生细菌的毒力。4.编码
大肠杆菌
的大肠菌素的质粒为Col质粒,编码产生大肠菌素。
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