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基因敲除后怎么验证
验证基因敲除
?
答:
1、提取转基因小鼠的RNA,以反转录后的cDNA为模板进行基因A的PCR
。2、
对照实验
:提取非转基因(野生型)小鼠的RNA,以反转录后的cDNA为模板进行基因A的PCR。3、如果对照组能通过PCR获得基因A或基因A的保守区,而实验组无结果,说明在转基因小鼠中发生了基因A的缺失。
基因敲除
,
验证
基本都是测序,也有用酶切的,不知哪个好?求解
答:
即基因敲除,植物不开花了,那我们就可以说,这是控制开花的基因;
2、用反义RNA进行抑制,基因不表达了,也可以确定
; 3、把这个基因克隆出来,转到另外一种生物上面,这种转基因生物能开花了,就可以验证了. 很简单吧?
做
基因敲除如何
快速筛出阳性克隆?
答:
通过病毒法,化学转染法或电转法将gRNA和Cas9转入细胞中,根据转染方法不同进行不同时长的药筛,药筛完成后挑选单克隆培养。选择不同的克隆分别进行靶位点扩增及测序
验证
,筛选出
基因敲除
的阳性克隆。
基因
功能
验证
有几种方法
答:
将打靶成功的细胞导入小鼠囊胚中,再将囊胚导入假孕小鼠体内,然后发育成为基因敲除的小鼠
,观察目的基因改变后的小鼠的生物学性状改变,由此达到验证目的基因功能的目的。
酵母
基因敲除后
用
回补验证
吗
答:
通过敲除来研究基因的功能,所谓的敲除不外乎有三种情况:1)单交换插入抗性基因使原基因失活;2)抗性基因双交换替换掉原基因;3)同框缺失即完整的使原
基因敲除
掉。第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量很大,前两种情况因为插入了抗性基因比较好筛选突变子,但是由于外源的插入了抗性基因容易引起...
从植物体中发现并获取了一新个
基因
,试问
如何
对其功能进行
验证
答:
先查找资料看这个新基因有没有与它比较相似的同源基因,推测它可能的功能。然后一般通过
基因敲除
或者干扰。看植物从表型上有什么变化。也可以过表达看表型的差异。
如何验证
某段
基因
的功能
答:
用
基因敲除
,表达,和过表达来
验证
。先用基因敲除看看,这种代谢产物是否还能表达。还有就是把预测的这个片段导入不能产生这种功能的宿主中去,看看这个被导入的宿主是否也能表达产生这种代谢产物。
本人做酵母的
基因敲除
,为何
敲除后
PCR
验证
出现两条带?一条野生型,一条...
答:
首先单倍体中是存在
基因
的多拷贝的。其次建议楼主检查一下实验,因为即使多拷贝也是都能敲掉的。楼主如果能确定你的酵母都是单倍体且是阳性的,那么检测拷贝数经典的方法是southern blotting楼主应该明白,不懂的话可以追问。创新且简单一点的方法就是realtime PCR用DNA作模板,用一个确定的单拷贝基因作...
CRISPR-Cas9
基因敲除
实验步骤 day 5-15 转染
验证
答:
顺带设计一下引物),将sgRNA插入到Cas9 backone质粒中,将质粒转入感受态细胞扩增,提取质粒后酶切
验证
。接着就是293T细胞转染验证了。使用常规的转染试剂Lipofectamine 3000或者罗氏等其他公司的转染试剂,按照protocol严格操作即可。昨天和今天都提取了
基因
组DNA,就酱紫。感谢师兄DZ ...
细胞
基因敲除
需要考虑等位基因吗
答:
当然需要,
基因敲除
最理想的情况是这个基因完全不表达。所以做gRNA载体之前,最好
验证
一下自己靶位点的正确性,再根据靶位点的突变情况修改gRNA。靶位点验证是CRISPR-U预实验环节最基本的步骤。
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