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原核表达的一般程序
真核基因在
原核
系统
表达的
主要步骤
答:
从技术上常用的流程大概就是:
①目的基因连接上载体,②将载体(通常为质粒)转染细菌,③培养并富集目的细胞,④检验表达效率
。(各个流程几乎都有很良好的试剂盒可以直接使用,操作流程也很简单)而目的基因在原核细胞中是以质粒的形式单独存在,而且常常有多个拷贝,其表达过程也是通过转录成RNA,然后再...
基因
原核表达的
详细过程
答:
【方法】 酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA,RT-PCR法扩增出resistin基因cDNA,经测序后,PCR产物亚克隆入T载体,用EcoRI和KpnI分别酶切重组T质粒和
原核表达
载体pGENKS,然后resistin基因片段和表达载体通过T4DNA连接酶进行定向连接,用核酸内切酶EcoRI、KpnI酶切和测序方法鉴定出重组表...
如何使基因在
原核
生物中
表达
答:
3、转化:找一种工程菌
,把它弄成感受态,把你连接好了的重组质粒和菌混了,让质粒钻到菌里面去。4、检验(筛选培养):看看质粒进到菌里面没有,目的基因连接到了质粒上了没有,一般是蓝白斑+抗生素抗性+电泳。
5、诱导表达
:加入诱导剂,等着菌表达 6、检测,看看产物出来没有,量多少、有没有活...
真核生物的基因在
原核
生物中
表达
,大致采用什么路线?
答:
通过载体或者是质粒转移到
原核
细胞中去,通过DNA翻译
表达
出来的蛋白质因为没有正确的空间折叠,所以不具备生物活性,只能分泌到细胞质中,形成包含体,工业上将细胞破碎后收集包含体,通过一系列方法使其空间结构发生变化,加入一系列配基的修饰,使其具有生物活性,重而达到复性的目的。
真核基因如何在
原核
生物中
表达
具体步骤
答:
那先要获取
表达
出此蛋白的基因(目的基因)然后将此基因整合进
原核
生物的DNA中 若要检测目的基因是否表达,可以将一段可以表达出抗药性的基因与目的基因一同转入,之后可将抗生素加入被植入目的基因的原核生物培养基中,则存活下来的个体就能将该蛋白合成 ...
植物基因中的大肠杆菌
原核表达
方法谁知道?生物医学工程方面的信息哪里...
答:
以pET-32a(+)为例,介绍将目的基因克隆进载体并进行表达获得重组蛋白的过程,从而熟悉根据自己的要求采用不同的载体进行
原核表达的
全过程。1.准备工作(试剂配置和器材准备)1)操作流程示意图主要步骤操作①制备pET-32a(+)载体 用限制性酶消化,去磷酸化后胶纯化回收②制备插入DNA PCR装入质粒后进行限制性...
原核
生物是如何进行基因
表达的
?
答:
4. 魔斑:当细菌生长过程中,遇到氨基酸全面缺乏时,细菌将会产生一个应急反应,停止全部基因的
表达
。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸(pppGpp)。PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子,而是影响一大批,所以称他们是超级调控子或称为魔斑。 5. 上游启动子元件:是...
急,如何构建
原核表达
载体
答:
2.PCR扩增片段 3.扩增后的片段与pMD18/19T克隆载体连接,通过蓝白斑筛选,提质粒并酶切鉴定;将正确连接的克隆载体重组质粒酶切,回收目的片段 4.目的片段与
表达
载体连接 5.转化到DH5a等克隆菌株,通过抗生素筛选,鉴定表达重组质粒。6.测序检测 7.正确的表达重组质粒再转到表达菌株 8.表达 ...
原核
生物如何
表达
遗传信息
答:
原核
生物有DNA也有RNA。原核生物以拟核代替细胞核,拟核中有环状DNA。可以说拟核就是细胞核的前身。原核细胞中还有核糖体,是产生蛋白质的场所。拟核中的DNA经转录产生信使RNA,信使RNA进入核糖体作为合成蛋白质的模版。原核生物的遗传信息
表达
过程与真核生物相似。原核生物遗传信息的表达详见高中教材。
如何做好
原核表达
答:
答:①DNA和染色体水平上的调控:基因的拷贝数扩增或丢失和基因重排,DNA修饰,在染色体上的位置,染色体结构(包括染色质、异染色质、核小体)都可影响基因
表达
.②转录水平上的调控:转录起始的控制和延伸的弱化对mRNA前体的水平都会产生影响.③转录后RNA加工过程和运送中的调控:真核基因转录出的mRNA前体,...
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