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制备感受态细胞的过程
感受态细胞的制备
答:
感受态细胞的制备
如下:1、从37℃培养过夜的新鲜平板中挑DH5α单菌落,接种到5mLLB培养基中,37℃下270r/min震荡培养过夜;2、取2mL过夜培养菌液注入到100mLLB培养基中,37℃下激烈震荡培养至A600=0.4~0.6(约2h);3、将培养液转移到灭菌过的50mL离心管中,在冰上放置10min;4℃下4000r/min...
感受态细胞的制备
视频时间 1:10
感受态细胞的制备
答:
感受态细胞的制备
如下:1、实验仪器及试剂 仪器超净工作台,摇床,高压灭菌锅,培养箱,制冰机,超低温冰箱,离心机,接种环,试管,摇瓶(2L),平板,移液枪,枪头,离心管(500mL),EP管(1.5mL),蓝盖瓶,泡沫箱 试剂CaCl2溶液PIPES1.51g,CaCl2•2H2O4.41g,甘油75ml,pH=7.0,定容至5...
谁做过酶切质粒的实验啊,制
感受态细胞
然后转化呢?求详细
过程
及注意要点...
答:
转化中的受体细胞: 转化
过程
所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株,即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株,常用 RM 符号表示。 转化方法:电击法、 CaCl2、 RuCl等化学试剂法
感受态细胞
:处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能容许外源 DNA 分子通过时
细胞的
状态。转化细胞(转化子):带有异源 DNA 分子的受...
感受态细胞
是如何
制备的
答:
1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟。2、 弃去上清,用预冷的0.05mol/L的CaCl2 溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g离心10分钟。3、弃去上清,加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/L的CaCl2 溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置几分钟,即成
感受态细胞
悬液...
感受态细胞的制备
方法是什么?
答:
CaCl2法制作
感受态细胞的
步骤:1.将大肠杆菌DH5a感受态细胞接种于普通LB平板上, 37℃恒温培养箱培养12-16h,挑取单个菌落,接种至10 mLLB普通肉汤中,37空气摇床震荡培养过夜。2.取0.25 mL过菌液,加入25 mL37℃预热的LB培养基中,扩大培养2-3h,使细菌生长至对数期(此时测定细菌培养液OD600为0.5...
感受态细胞的制备
答:
目前,
感受态细胞的制备
常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备,即用低渗CaCl2溶液在低温(0℃)时处理快速生长的细菌,从而获得感受态细菌.此时细菌膨胀成球形,外源DNA分子在此条件下易形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附在细菌表面,通过热激作用促进细胞对DNA的吸收.转化效率可达106-107转化子/微克DNA。注意...
如何
制备
大肠杆菌
感受态细胞
答:
二、
感受态细胞的制备
( CaCl2 法)1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟.2、 弃去上清,用预冷的0.05mol/L的CaCl2 溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g离心10分钟.3、弃去上清,加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/L的CaCl2 溶液,轻轻悬浮细胞,...
如何
制备
大肠杆菌
感受态细胞
答:
ml轻轻悬浮细胞,充分混匀,冰上放置30 min后,4℃下4000rpm离心10min;(5)弃去上清,并倒置1 min,以便最后的痕量培养液流尽;(6)加入4 ml预冷含15%甘油的0.1 mol/L的CaCl2溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置几分钟,即成
感受态细胞
悬液;(7)感受态细胞100 μL分装,贮存于-70 ℃保存备用。
电转
感受态细胞的制备
答:
枪头需要剪去尖头;4. 如果做的效果好,效率可以达到 1010以上。对于 E.coli
感受态制备
,以上实验方案都要特别注意:所有的容器要用新的,不用洗涤剂,用手洗且保证彻底干净;相应的器材要作为
制备感受态细胞
专用,不做其他用途;试剂要选用最好的,尽量过滤除菌,不用高压灭菌等等。
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